服務(wù)編號(hào)：BIOFW038-3D
技術(shù)簡(jiǎn)介
蛋白質(zhì)非標(biāo)（Label free）定量技術(shù)是一種不依賴于同位素標(biāo)記的蛋白質(zhì)定量技術(shù)，該技術(shù)依據(jù)蛋白質(zhì)豐度與質(zhì)譜數(shù)據(jù)一級(jí)譜圖肽段峰強(qiáng)度或二級(jí)譜圖數(shù)目呈現(xiàn)一定相關(guān)性的原理，無(wú)需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)，只需通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行大規(guī)模分析，比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號(hào)強(qiáng)度，從而對(duì)肽段對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對(duì)定量。
相比較iTRAQ/TMT等標(biāo)記方法，Label Free具有特定的技術(shù)優(yōu)勢(shì)：檢測(cè)起始樣本量少； 前處理少，更多保留樣本原始信息；對(duì)于低豐度多肽的覆蓋程度更高；不受標(biāo)記試劑盒限制，可進(jìn)行大批量的樣本檢測(cè)。
技術(shù)原理
蛋白質(zhì)非標(biāo)記定量技術(shù)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析。比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強(qiáng)度，分析不同來(lái)源樣品蛋白的數(shù)量變化，肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測(cè)的頻率與其在混合物中的豐度成正相關(guān)，因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測(cè)的計(jì)數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度，通過適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測(cè)計(jì)數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來(lái)，從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。
基于質(zhì)譜的非標(biāo)記定量方法主要有兩種：一種是依據(jù)一級(jí)質(zhì)譜相關(guān)的肽段峰強(qiáng)度和峰面積等信息進(jìn)行蛋白定量，另一種是依據(jù)蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)肽段的二級(jí)質(zhì)譜總數(shù)進(jìn)行定量。
技術(shù)流程
1 蛋白樣品準(zhǔn)備
2 蛋白酶解
3 液相色譜分離
4 質(zhì)譜圖解
5 生物信息學(xué)分析
技術(shù)應(yīng)用
發(fā)病機(jī)理研究
藥物靶點(diǎn)研究
疾病標(biāo)志物篩選
工程菌改造
特殊功能蛋白質(zhì)篩選
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
樣本需求量少
對(duì)樣本的處理少，接近樣本原始狀態(tài)
無(wú)需昂貴的同位素標(biāo)簽標(biāo)記，實(shí)驗(yàn)耗費(fèi)低
不受樣本條件的限制，克服了標(biāo)記定量技術(shù)在對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行定量方面的缺陷
可以檢測(cè)到的肽段動(dòng)態(tài)范圍達(dá)4個(gè)數(shù)量級(jí)以上，提高低濃度蛋白檢出率和非標(biāo)定量的準(zhǔn)確性
樣品要求
常規(guī)真菌需要80mg/樣
常規(guī)細(xì)菌需要20mg且>30uL沉淀/樣
真菌類樣本需求量以酵母為例。若樣本為孢子等特化組織，送樣量需加倍；菇類大型蕈菌，送樣量請(qǐng)參照植物樣本需求量100mg/樣
服務(wù)流程
雙方溝通一致后確定實(shí)驗(yàn)方案，確定服務(wù)要求-簽訂合同—預(yù)付款-開始實(shí)驗(yàn)-成果交付
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