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ScFv/Fab抗體制備

服務編號：BIOFW088

服務簡介

單鏈抗體（ScFv）是由一段彈性連接肽把抗體可變區(qū)重鏈（VH）與輕鏈（VL）相連而成，是具有親代抗體全部抗原結合特異性的小功能結構單位，以分子量?。▋H為完整抗體的1/6）、穿透力強、體內半衰期短、免疫源性低、可在原核細胞系統(tǒng)表達以及易于進行基因工程操作等特點而備受關注，近年來已在生物學、醫(yī)學領域、實驗室研究及疾病的診治方面取得了長足的進展。Fab段是指抗原結合片段，相當于抗體分子的兩個臂，由一個完整的輕鏈和重鏈的VH和CH1結構域組成。單鏈抗體常常又存在親和力低、功能單一、穩(wěn)定性較差、體內清除過快等不足。通常Fab和ScFv片段具有半衰期短和親和力差的特征，然而在體內與體外的應用中，抗體分子的多價性至關重要。能夠結合兩個或多個結合位點不僅能有效的增加抗體分子的功能親和力，而且還能使具有雙特異的抗體的構建成為可能。

ScFv/Fab抗體為重組抗體，也稱為基因工程抗體，是指通過DNA重組技術將抗體相應的基因序列根據需要進行改造和重組，并構建在質粒上，再通過蛋白外源表達技術將構建好的質粒轉染/轉化入適合的宿主細胞表達獲得的抗體。重組抗體很好的解決了動物源抗體引起的人體排斥反應，使得抗體實現(xiàn)人源化，使抗體的效能更為完善。

百歐泰致力于基因、重組蛋白、抗體、噬菌體文庫等生物制劑的研發(fā)，并致力于為客戶提供一站式的CRO技術服務。

服務步驟

常用方法

單鏈抗體的制備：

scFv可在多個表達系統(tǒng)中進行表達，目前比較常用的，是大腸桿菌表達系統(tǒng)和哺乳動物表達系統(tǒng)。另外可以使用噬菌體展示技術生產得到scFv片段，通過免疫動物得到雜交瘤細胞，從中提取CDNA，利用逆轉錄PCR得到全套抗體的重鏈可變區(qū)VH和輕鏈可變區(qū)VL，利用重疊PCR將VH和VL片段擴增得到可變區(qū)基因片段，然后將基因克隆到噬菌體載體中了，電轉感受態(tài)大腸桿菌，輔助噬菌體超染，得到的上清液即為單鏈抗體庫，以抗原為固相，經過3-5輪吸附-洗脫-擴增篩選，即可得到單鏈抗體。

Fab片段的制備：

目前有酶解法、利用表達系統(tǒng)制備以及利用噬菌體展示技術進行抗體庫篩選等方法進行Fab片段的制備。

酶解法：通常用木瓜蛋白酶或昌蛋白酶等對免疫球蛋白G進行降解，得到Fab，F(xiàn)c片段等產物；利用表達系統(tǒng)生產Fab片段：通常利用大腸桿菌表達系統(tǒng)與哺乳動物動物表達系統(tǒng)；大腸桿菌表達系統(tǒng)具有生產成本低，生產速度快等優(yōu)點，但是容易形成包涵體，復性后活性難以保證活性；用哺乳動物表達，可以順利形成二硫鍵；更接近天然Fab結構，活性也更好；噬菌體展示技術：制備Fab片段抗體庫，可經過熟輪的篩選富集，即可得到高親和性的抗體。

服務優(yōu)勢

百歐泰團隊具有豐富的抗體制備經驗，可提供多種服務優(yōu)勢：

l 保證極高的成功率與快速交付速度；

l 服務為主：價格合理，可根據客戶需求綜合分析，為客戶提供滿意的結果；

l 專業(yè)的技術支持，保障強力、周到及時的售前售后服務支持，隨時為您解答出現(xiàn)的任何問題；

l 完整的上下游服務：提供從抗體制備、抗體測序，抗體標記修飾一站式技術服務，節(jié)約客戶寶貴時間和經費。

l 凍融穩(wěn)定性高、體內半衰期2-3 weeks、有效控制免疫原性風險；

l 獨特靈活分子性實現(xiàn)雙靶點作用的精細調節(jié)，達到更佳藥效。

服務流程

雙方溝通一致后確定實驗方案，確定服務要求-簽訂合同—預付款-開始實驗-成果交付

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